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大蒜素是從植物大蒜的蒜頭中提取的一種含有機(jī)硫的化合物,在洋蔥或其他蔥中都能發(fā)現(xiàn),具有強(qiáng)烈的蒜臭氣味,味道辣。大蒜素不溶于甘油、丙二醇等,但可以和乙醇、氯仿、苯醌等混合。具有較強(qiáng)的抗菌作用,但對(duì)熱和堿不穩(wěn)定,當(dāng)遇到熱或堿的條件下,就失去抗菌能力了,不過(guò)對(duì)酸還是挺穩(wěn)定的。一般情況下,大蒜素對(duì)大腸桿菌、霉菌、病毒等有明顯的抑制作用,在食品、醫(yī)藥和飼料等行業(yè)都會(huì)用到它。
檢測(cè)樣品中大蒜素的含量,一般采用氣相色譜(GC)法、高效液相色譜(HPLC)法、質(zhì)譜(MS)法、分光光度法等。這里簡(jiǎn)單的介紹一下,具體操作可以參考相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn),也可以咨詢有經(jīng)驗(yàn)的老師。
1.氣相色譜(GC)法
使用GC檢測(cè)大蒜素,為了獲得更準(zhǔn)確的檢測(cè)數(shù)據(jù),一般情況下會(huì)和質(zhì)譜聯(lián)用起來(lái)。GC-MS檢測(cè)有一個(gè)主要的優(yōu)點(diǎn),就是能夠減少可能出現(xiàn)的大蒜素易腐蝕和易揮發(fā)的問(wèn)題,可以更準(zhǔn)確的測(cè)出樣品中的大蒜素含量。檢測(cè)的主要步驟包括:制備大蒜素樣品-對(duì)樣品進(jìn)行提取-采用GC-MS檢測(cè)-獲取數(shù)據(jù)并分析。在檢測(cè)的過(guò)程中,需要有持續(xù)的氣體供應(yīng)。由于大蒜素在高溫的條件下會(huì)被分解破壞,柱溫不要太高,適宜的溫度為70℃。
2.高效液相色譜(HPLC)法
HPLC檢測(cè)樣品中的大蒜素,克服了GC-MS檢測(cè)的過(guò)程色譜柱溫度高、不穩(wěn)定的情況。在HPLC的檢測(cè)過(guò)程中,可以在較低的柱溫下進(jìn)行,測(cè)定的過(guò)程中采用反相色譜柱。大致步驟包括:制備大蒜素標(biāo)準(zhǔn)品溶液-上機(jī)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品-標(biāo)準(zhǔn)曲線制作-樣品制備并檢測(cè)-讀取數(shù)據(jù)-計(jì)算含量-分析結(jié)果。
3.分光光度法
在一定的溫度下,大蒜素能夠在酶的作用下水解產(chǎn)生丙酮酸??梢酝ㄟ^(guò)測(cè)定產(chǎn)生丙酮酸的方法,計(jì)算出樣品中含有大蒜素的含量。丙酮酸怎么檢測(cè)呢?因?yàn)楸峥梢院?,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯肼沉淀。利用分光光度計(jì)測(cè)定有色產(chǎn)物,通過(guò)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè),制作出相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程,并對(duì)樣品在同樣的條件下檢測(cè),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中大蒜素的含量。