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多胺氧化酶檢測(cè)方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2024-05-30 | 268 次瀏覽 | 分享到:

多胺氧化酶是一種這樣類型的酶,它可以將多胺類物質(zhì)比如精胺、腐胺、亞精胺氧化成胺類,以及對(duì)應(yīng)的酮類產(chǎn)物。因此,多胺氧化酶參與并調(diào)節(jié)植物體內(nèi)的多胺物質(zhì)的代謝,從而對(duì)植物的生長(zhǎng)和發(fā)育起著重要的促進(jìn)作用。



如果多胺氧化酶的活性降低,多胺物質(zhì)含量相對(duì)增加。多胺物質(zhì)能夠阻止細(xì)胞的衰老,而多胺氧化酶能把多胺給氧化掉,就會(huì)促進(jìn)細(xì)胞衰老。多胺氧化產(chǎn)物有過氧化氫,它可以誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高,從而影響到細(xì)胞代謝和信號(hào)的傳到。檢測(cè)多胺氧化酶,這里用到的方法有分光光度法、酶聯(lián)免疫法等。



分光光度法檢測(cè)的原理:多胺氧化酶能夠和某些試劑發(fā)生反應(yīng),反應(yīng)的過程中會(huì)形成可使用光譜檢測(cè)到的化合物。常用的試劑有二氫吡啶、硫代硫酸鈉等。其中,二氫吡啶法是常用的一種。當(dāng)二氫吡啶和多胺氧化酶發(fā)生反應(yīng)的時(shí)候,生成了吡啶酮和過氧化氫。此時(shí),過氧化氫在過氧化酶的作用下和底物發(fā)生顯色反應(yīng),在550nm處具有特征的吸收峰。反應(yīng)產(chǎn)物顏色的變化和多胺氧化酶活性成正比,通過測(cè)定吸光度值的方式來,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中含有多胺氧化酶的活性。



酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法:通常情況下,采用elisa的方法檢測(cè)多胺氧化酶,可以采用試劑盒的形式測(cè)定。向預(yù)先包被抗體的微孔中,以此加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB進(jìn)行顯色反應(yīng),在反應(yīng)的過程中TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,并在酸的作用下最終轉(zhuǎn)化為黃色。顏色的深淺和樣品中多胺氧化酶的含量是成正相關(guān)的。通過酶標(biāo)儀,在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的多胺氧化酶活性。


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