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植物還原性糖檢測方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2024-05-31 | 303 次瀏覽 | 分享到:

植物組織中含有還原糖是一個大類,因為在糖類中,分子結(jié)構(gòu)中含有游離醛基或酮基的單糖,以及含有游離醛基的二糖都具有還原性。從大體上來說,還原糖主要有葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖和麥芽糖等。因為還原糖的特征比較明顯,就是含有醛基或酮基。我們需要采用試劑反應(yīng)的方法,和專門和這些醛基和酮基發(fā)生作用,生成顯色的產(chǎn)物,就可以通過對產(chǎn)物特征的檢測,計算出還原糖的含量。通常的檢測方法有3,5-二硝基水楊酸法和斐林試劑滴定法。



菲林試劑法,就是利用還原糖和菲林試劑發(fā)生作用,生成磚紅色的沉淀。菲林試劑用的是0.1g/mL的NaOH溶液和0.05g/mL的CuSO4溶液配制而成的,注意要現(xiàn)配現(xiàn)用。還原糖在堿性溶液中,加熱的情況下,能夠把菲林試劑中的Cu2+還原為Cu+,也就是氧化亞銅,使得藍色的菲林試劑沒有了本身的顏色。


配制好的菲林試劑呈現(xiàn)藍色的氫氧化銅沉淀,這種沉淀和酒石酸鉀鈉反應(yīng),生成可溶性酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物。在加熱的條件下,以次甲基藍為指示劑,使用植物組織提取液滴定。提取液中的還原糖會和酒石酸鉀鈉銅發(fā)生反應(yīng),生成磚紅色的氧化亞銅沉淀,等滴定到終點的時候,稍微過量的還原糖就能夠?qū)⒋渭谆{轉(zhuǎn)還原,由藍色馬上變?yōu)闊o色,就是滴定的終點了。記錄一下滴定過程中消耗的提取液,計算出樣品中含有還原糖的量。由于還原糖具有醛基和酮基,在堿性溶液中煮沸,能把斐林試劑中的Cu2+還原成Cu+,使藍色的斐林試劑脫色,脫色的程度與溶液中含糖量成正比,在590 nm波長下比色測定吸光度值,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可以計算出所測樣品中還原糖的含量。



3,5-二硝基水楊酸溶液和樣品中的還原糖,在加熱的條件下,能夠還原成棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸化合物。在一定的范圍內(nèi),還原糖的含量和顏色的變化是成一定線性關(guān)系的,在分光光度計的540nm波長處可以測定棕紅色物質(zhì)的吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算出樣品中的還原糖含量。


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