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可溶性糖含量檢測(cè)方法
來(lái)源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2024-06-17 | 200 次瀏覽 | 分享到:

植物體內(nèi)的可溶性糖,主要是指溶于水和乙醇的單糖和寡聚糖。這類糖主要有碳?xì)溲跞N元素組成,羥基醛或酮類水解后生成多羥基醛或酮的一類化合物??扇苄蕴鞘侵参镄玛惔x的基礎(chǔ),是生長(zhǎng)代謝所需要的重要能量來(lái)源,也為植物生長(zhǎng)提供能量和中間產(chǎn)物,促進(jìn)植物種子萌發(fā)和早起幼苗發(fā)育。可溶性糖作為小分子有機(jī)物,參與植物細(xì)胞內(nèi)滲透壓的調(diào)節(jié),在植物葉片形成、果實(shí)成熟、衰老等過(guò)程中起著重要的作用。



檢測(cè)植物可溶性糖的方法,常見(jiàn)的有苯酚法、蒽酮法、斐林試劑法等。


1.苯酚法測(cè)定


原理:植物組織中的可溶性糖在濃硫酸的作用下,脫水生成糠醛或羥甲基醛,并和苯酚縮合成一種橙紅色的化合物。這種化合物的顏色的均勻的,穩(wěn)定的,而顏色的深淺在一定范圍內(nèi)和可溶性糖含量成正比的。在分光光度計(jì)485nm波長(zhǎng)下可以獲得最大吸收峰,通過(guò)比色的方法可以快速檢測(cè)可溶性糖含量。


比色法檢測(cè),一定要進(jìn)行的步驟是樣品處理、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作、測(cè)定并計(jì)算結(jié)果。推薦的方法,將新鮮的植物葉片,清洗干凈,剪碎混勻,精準(zhǔn)稱量,并在沸水中提取30min,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的操作步驟完成就可以了,這里就不一一的描述。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作,離不可標(biāo)準(zhǔn)品。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品的測(cè)定是要認(rèn)真的,它是定基準(zhǔn)線的作用。依次加入苯酚、濃硫酸,搖勻,在恒溫的環(huán)境中放置30min,顯色,然后以空白作為對(duì)照。在分光光度計(jì)485nm波長(zhǎng)下測(cè)定各個(gè)試管的吸光度值,以糖含量為橫坐標(biāo),以吸光度值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。對(duì)樣品同樣的方法進(jìn)行測(cè)定,可以重復(fù)2-3次,求取平均值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的可溶性糖含量。



2.蒽酮法測(cè)定


此方法的原理是糖類遇濃硫酸脫水生成糖醛或其衍生物,反應(yīng)如下:糠醛或羥甲基糠醛進(jìn)一步與蒽酮試劑縮合產(chǎn)生藍(lán)綠色物質(zhì),其在可見(jiàn)光區(qū)620 nm波長(zhǎng)處有最大吸收,且其光吸收值在一定范圍內(nèi)與糖的含量成正比關(guān)系。此法可用于單糖、寡糖和多糖的含量測(cè)定。


3.斐林試劑測(cè)定


植物組織中的可溶性糖可分為還原糖(主要是葡萄糖和果糖)和非還原糖(主要是蔗糖)兩類。還原糖具有醛基和酮基,在堿性溶液中煮沸,能把斐林試劑中的Cu2+還原成Cu+,使藍(lán)色的斐林試劑脫色,脫色的程度與溶液中含糖量成正比,在590 nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可計(jì)算出所測(cè)樣品中還原糖的含量。


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