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谷氨酰胺是一種非必需氨基酸,在人的肌肉中是通過谷氨酰胺合成酶,將谷氨酰胺鹽和氨合成而來,也有用葡萄糖在體內(nèi)轉(zhuǎn)變來的。通過食物獲取,一般有瘦肉類,豆類,蛋類,海鮮類等。谷氨酰胺在人體內(nèi)的主要作用,包括增強(qiáng)肌肉量、促進(jìn)肝臟健康、改善腸道健康、提高免疫系統(tǒng)功能、減輕壓力等。谷氨酰胺分子式為C5H10N2O3,由一個(gè)α-氨基基團(tuán)、一個(gè)羧基、一個(gè)側(cè)鏈和一個(gè)酰胺基團(tuán)組成。在水中溶解,在乙醇或乙醚中幾乎不溶。
檢測樣本中谷氨酰胺的方法,有滴定法,酶學(xué),電化學(xué)法,高效液相色譜(HPLC)法,質(zhì)譜(MS)法等。
以HPLC為例,介紹一下檢測的流程,具體操作步驟需要結(jié)合相關(guān)的文獻(xiàn)資料或權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)。
1.樣品處理
如果是粉末的話,可以進(jìn)行精密稱量,加蒸餾水稀釋成2.5g/L的溶液。
2.色譜條件
C18的色譜柱,這是常用的,以辛烷磺酸鈉和乙腈(95:5)為流動相,等度洗脫,流速1ml/min;紫外檢測器,波長210nm;進(jìn)樣量10uL,根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。方法并不是死的,是可以根據(jù)樣品和實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件來選擇的??梢杂眠@種流動相,也可以用那種流動相。可以用等度洗脫,也可以梯度洗脫。如果固執(zhí)住一種方法,如果樣品變化了,而測不出來的話,就不能確定是樣品還是方法。如果樣品中確實(shí)沒有或很少,提取方法有限的情況下,需要考慮更高精密度的設(shè)備。如果是提取過程需要優(yōu)化,而不能怪方法不夠精準(zhǔn)。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
取谷氨酰胺對照品適量,精密稱定,放在一個(gè)容量瓶中,加水溶解并稀釋成12.5ug/mL的溶液。梯度稀釋6個(gè)濃度點(diǎn),最低點(diǎn)確保在檢測器有效范圍內(nèi),一般是以信噪比的5-10倍為定量限。以有效的色譜條件,依次測出各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰。對峰面積進(jìn)行積分,對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。
4.樣品測定和計(jì)算
對樣品的檢測,是基于標(biāo)準(zhǔn)品能夠出一個(gè)比較好的色譜峰。并且記錄這個(gè)色譜峰的保留時(shí)間,等用同樣的色譜條件測樣品的時(shí)候,也會在這個(gè)地方出現(xiàn)色譜峰。如果沒有出現(xiàn),就要看一下是不是其他方面的問題。在樣品測試的過程中,由于雜質(zhì)的影響或溶劑和樣品的混合不確定性,可能會出現(xiàn)色譜峰不穩(wěn)定的或不符合預(yù)期的情況。需要根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整,或重新測試。如果是相對理想的色譜峰,結(jié)合回歸方程,是可以計(jì)算出樣品中的谷氨酰胺含量的。