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先說一下,苦瓜皂苷是從葫蘆科植物的果實(shí)中提取出來的一種有機(jī)化合物,在苦瓜的種子和莖葉中也存在苦瓜皂苷。苦瓜中的皂苷主要是甾體類皂苷和三萜類皂苷,具有祛暑明目、解毒涼血等作用。根據(jù)苦瓜皂苷的動(dòng)物實(shí)驗(yàn),在一定程度上具有降低血糖、降低血漿中的膽固醇含量的作用。另外,苦瓜皂苷可以抑制葡萄糖-6-磷酸酶和果糖-1,6-二磷酸酶活性,從而抑制糖異生作用。增強(qiáng)細(xì)胞色素P450的活性,加速葡萄糖氧化??喙显碥諏?duì)消化道內(nèi)的α-糖苷酶和α-淀粉酶具有一定的抑制作用,降低小腸上皮細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取。
常規(guī)的檢測(cè)苦瓜皂苷含量的方法,包括紫外-可見光分光光度計(jì)或高效液相色譜儀(HPLC)等。
在測(cè)定苦瓜皂苷含量之前,需要對(duì)苦瓜樣品進(jìn)行處理。將新鮮的苦瓜進(jìn)行干燥,去除水分后,粉碎成粉末,過篩后的樣品經(jīng)過石油醚脫脂。準(zhǔn)確的稱量處理后的樣品,這個(gè)數(shù)據(jù)是要計(jì)算含量用的。比如加2.5g放到250mL的碘量瓶中,加入一定量的乙醇溶液,過濾后加入正丁醇溶液萃取,分離出正丁醇,再進(jìn)行濃縮,真空干燥得到苦瓜皂苷。
用分光光度法測(cè)定苦瓜皂苷含量,就要用到標(biāo)準(zhǔn)曲線了。標(biāo)準(zhǔn)品參考用的是人參皂苷Rg1的標(biāo)準(zhǔn)品,稱取2mg,加入無水乙醇溶解定容至4mL,搖勻,作為對(duì)照品溶液。精密吸取0.05,0.10,0.15,0.20,0.25,0.30mL,分別到具塞試管中,加入新配制的5%的香草醛-冰乙酸溶液0.2mL,高氯酸0.8mL。在60℃的水浴中加熱15min,流水冷卻,加入冰乙酸5mL,搖勻,在15min內(nèi)在分光光度計(jì)上548nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。以對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度值為縱坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。
和標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的條件下,測(cè)定樣品的吸光度值,可以取無水乙醇作為空白對(duì)照,可以做幾個(gè)重復(fù),求取平均值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出樣品中含有的苦瓜皂苷的含量。