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酪氨酸是一種含有酚羥基的芳香族極性α-氨基酸,它是人體必需的氨基酸。酪氨酸是用作生產(chǎn)食品、飼料、化工、原料藥等。在食物中含量尤為豐富,比如西紅柿、動(dòng)物肝臟、魚類、香蕉、菠蘿、柑橘等。酪氨酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸,它具有電離的芳香環(huán)側(cè)鏈,在人和動(dòng)物體內(nèi)由苯丙氨酸羥化而形成的,對(duì)新陳代謝、生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的作用。有多重要?這么說吧,它常作為苯丙酮患者的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑。
檢測(cè)植物中的酪氨酸含量,可以用HPLC或LC-MS,也可以用紫外分光光度法。在科研領(lǐng)域,根據(jù)對(duì)酪氨酸的研究程度,選擇對(duì)應(yīng)的檢測(cè)方法。檢測(cè)不是目的,是為了獲取更準(zhǔn)確的結(jié)果,從而為對(duì)微觀領(lǐng)域的探索做出指導(dǎo)。根據(jù)對(duì)植物中的酪氨酸的含量、結(jié)構(gòu)等方面檢測(cè),進(jìn)一步判斷是什么部位或結(jié)構(gòu)與眾不同,在代謝機(jī)制中發(fā)揮著不可替代的作用。通常情況下,我們了解的植物有很多種,不只是為了知道有多少含量,為發(fā)揮機(jī)制,甚至科研做進(jìn)一步的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。因此,檢測(cè)數(shù)據(jù)對(duì)結(jié)果有比較大的影響。而檢測(cè)數(shù)據(jù)是靠過程中的操作和方法來決定的,考察操作的基本功,更是對(duì)方法的探索。
先用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸溶液,使用不同的檢測(cè)波長(zhǎng)測(cè)定,找到最大的吸收值對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng),將這個(gè)波長(zhǎng)固定為檢測(cè)酪氨酸的波長(zhǎng)。取5只比色管,將標(biāo)準(zhǔn)的酪氨酸配制成5個(gè)梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值。以濃度為橫坐標(biāo),以吸光度值為縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線來。對(duì)樣品進(jìn)行處理,并在標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測(cè)同樣的條件下測(cè)定其吸光度值,可以重復(fù)幾次,求取平均值。用測(cè)定的吸光度值,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以計(jì)算出樣品中所含有的酪氨酸濃度。這是一種參照的方法,和所有光譜一樣,都要依據(jù)一定的線性關(guān)系,才能準(zhǔn)確獲得某個(gè)吸光度值對(duì)應(yīng)的濃度。
對(duì)于酪氨酸的檢測(cè),如果需要用LC-MS測(cè)定,那是想對(duì)精準(zhǔn)的了。首先,LC-MS檢測(cè)的靈敏度高,通過LC將樣品中的雜質(zhì)盡可能的去除,獲得想對(duì)干凈的、有效的酪氨酸。但這還不夠,要通過質(zhì)譜檢測(cè)器,以電荷比的形式來確定分子量,定量測(cè)定酪氨酸的含量。這種方法需要有專業(yè)的技術(shù)人員,不僅熟悉設(shè)備的操作,對(duì)方法也要有足夠的了解,可以做方法驗(yàn)證,也能夠調(diào)試設(shè)備,處理數(shù)據(jù)和報(bào)告。一般科研方面,可以有專業(yè)的機(jī)構(gòu)來完成。