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細(xì)胞色素P450是什么呢？它是一個(gè)很大的家族啊。是可自身氧化的亞鐵血紅素蛋白，因?yàn)槟軌蛟?50nm波長(zhǎng)的地方能夠擁有特異的吸收峰，因此就稱(chēng)為細(xì)胞色素P450。為什么要研究細(xì)胞色素P450呢，因?yàn)樗撬幬锎x過(guò)程中的關(guān)鍵酶，對(duì)細(xì)胞因子和體溫調(diào)節(jié)有重要的影響。細(xì)胞色素P450主要存在于細(xì)菌、真菌、植物和動(dòng)物的線粒體和微粒體中，藥物主要作為細(xì)胞色素P450的底物、抑制劑或誘導(dǎo)劑。

檢測(cè)細(xì)胞色素P450的方法有多種，比如ELISA試劑盒，ELISA是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)。它是將待測(cè)物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品，在處理過(guò)后，加入到微孔板中，按說(shuō)明書(shū)的操作步驟完成反應(yīng)，微孔中產(chǎn)生的顏色和樣品濃度是呈線性關(guān)系的，通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以計(jì)算出樣品中細(xì)胞色素P450的含量。

今天我們了解一下高效液相色譜（HPLC）法。它是一種常用的測(cè)定細(xì)胞色素P450（CYP450）含量的方法，在檢測(cè)的過(guò)程中離不開(kāi)有效的操作步驟。從廣義上來(lái)說(shuō)，細(xì)胞色素P450和細(xì)胞色素P450酶是一個(gè)東西。

第一步，就是對(duì)樣品進(jìn)行處理。這里呢，主要是從細(xì)胞或組織中將P450酶給提取出來(lái)，通常涉及到裂解和制備的過(guò)程，可參考相關(guān)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行，注意提取過(guò)程中的條件和參數(shù)。

第二步，選擇適合CYP450酶的特異性底物，也就是將這個(gè)底物和CYP450酶結(jié)合起來(lái)，可以通過(guò)HPLC的檢測(cè)器清晰的分辨并獲得信號(hào)數(shù)據(jù)，從而便于進(jìn)一步的分析。

接著呢，就是要對(duì)檢測(cè)條件進(jìn)行優(yōu)化。其實(shí)，就是確定HPLC檢測(cè)過(guò)程中的參數(shù)。比如，色譜柱的選擇，流動(dòng)相的配制，進(jìn)樣量，進(jìn)樣速率，柱溫，檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)等。如果有現(xiàn)成的方法可以用，如果沒(méi)有的話，就要驗(yàn)證，獲得最佳的參數(shù)后再繼續(xù)下去。對(duì)樣品進(jìn)行處理，通過(guò)比較標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出樣品中的CYP450的含量。