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丹皮酚是從毛茛科植物牡丹干燥的根皮中提取出來的一種有機化合物,根據(jù)藥理藥效研究證明,丹皮酚具有鎮(zhèn)痛、抗炎、解熱、降壓等作用。在實驗的過程中,準確檢測丹皮酚的含量,對數(shù)據(jù)分析具有重要的意義。獲得檢測數(shù)據(jù)是科研的基礎,是檢測過程的結束,也是科研工作的開始。檢測樣品中的丹皮酚含量,常用的方法是高效液相色譜(HPLC)法,這里簡單的介紹一下,希望有所參考和幫助,如果有遺漏和不足之處,希望可以相互學習。
HPLC測植物中的丹皮酚含量,主要包括試劑和設備、樣品制備、HPLC調試和檢測,標準曲線制作、計算結果和分析等過程。熟悉HPLC的操作的技術對色譜條件是非常重視的,C18的色譜柱可以分離出樣品中丹皮酚,以甲醇和水為流動相,選擇紫外檢測器并設置最佳波長,比如274nm。柱溫35℃,并確定最佳的進樣量和流速。根據(jù)設備和材料,如果跟標準的方法有不同,就可能需要重新進行驗證。
標準曲線制作:做液相檢測含量,基本上都需要做標曲的。精確稱量丹皮酚的標準品,如果稱量的過程少了或多了,標曲就會發(fā)生變化,因此操作的過程對實驗基本功還是有要求的。用蒸餾水對標準品進行梯度稀釋,能夠有6個不同的標準濃度,目的是能在檢測器上獲得對應的色譜峰。峰值和濃度是呈對應關系的,以峰面積積分值對濃度進行回歸,繪制標準曲線。
對樣品進行處理,這一步看起來是準備工作,其實是很重要的。很多時候,我們發(fā)現(xiàn)檢測結果有偏差,卻又找不到原因,可能需要從最基礎的樣品處理關注起來。樣品處理真的是“差之毫厘,謬以千里”,如果處理不到位而造成濃度偏低,如果稱量多了可能會偏大。當然,檢測過程中的方法,對圖譜的分析,數(shù)據(jù)計算也是很關鍵的。對樣品的處理,有標準的操作要求,在和標準品檢測相同的條件下上機測定,通過外標法計算出丹皮酚的含量。