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在人體必需氨基酸中，有一個(gè)特殊的氨基酸，就是色氨酸，又稱為β-吲哚基丙氨酸。它是植物體內(nèi)生長素生物合成重要的前體物質(zhì)，結(jié)構(gòu)和IAA相似，在高等植物中普遍存在。色氨酸首先脫氨氧化形成吲哚丙酮，再脫羧形成吲哚乙醛；在催化氧化成吲哚乙酸，這就是生長素了。它是有機(jī)物，在水中不怎么溶解，在乙醇中也不太好溶，氯仿更不用說了。但是，它能在甲酸中溶解。色氨酸在人體內(nèi)有可大的作用了，它改善了人體的睡眠質(zhì)量，調(diào)節(jié)了不愉快的情緒。研究色氨酸，對(duì)于生物、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域，還是有重要的價(jià)值和意義的。

檢測(cè)色氨酸，就要找到它的特征，才能從樣品中發(fā)現(xiàn)它的含量。就目前來說，檢測(cè)它的方法有分光光度法、高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法、熒光法等。

1.分光光度法

色氨酸并不是在樣品中獨(dú)立存在的，將樣品進(jìn)行水解。樣品中的蛋白質(zhì)會(huì)降解為多肽和游離氨基酸，在酸性介質(zhì)中，氧化劑的作用下，色氨酸吲哚環(huán)和對(duì)二氨基苯甲醛發(fā)生反應(yīng)，生成藍(lán)色的化合物，在一定范圍內(nèi)顏色深淺和色氨酸的含量是呈線性正比關(guān)系的。通過對(duì)梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品在分光光度計(jì)最佳波長處測(cè)定吸光度值，以濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，或計(jì)算出回歸方程。對(duì)樣品進(jìn)行處理并上機(jī)檢測(cè)，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的吸光度值，可以計(jì)算出色氨酸的含量。

2.高效液相色譜（HPLC）法

檢測(cè)色氨酸，色譜條件是比較關(guān)鍵的。如果有現(xiàn)成的方法，也要進(jìn)行測(cè)試一下，看是否滿足需求。參考比如，使用C18的色譜柱，以甲醇+0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相，在系統(tǒng)中設(shè)置1ml/min的流速，柱溫是不能忽略的，通?？梢栽O(shè)置35℃，檢測(cè)波長280nm。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：標(biāo)準(zhǔn)曲線就是一把尺子，精密的吸取色氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（需要提前按要求配制）1.0，5.0，10.0ml，分別置于100ml的容量瓶中，用水定容到100mL，搖勻。分別取10ul標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣檢測(cè)，以測(cè)定色氨酸的峰面積，對(duì)色氨酸濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

樣品的測(cè)定：取樣品溶液10uL，進(jìn)樣到HPLC中測(cè)定，根據(jù)色譜峰保留時(shí)間，外標(biāo)法定量檢測(cè)。

結(jié)果計(jì)算：根據(jù)樣品的色譜峰面積，由標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程中得到樣品中色氨酸的含量。