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木犀草素是從金銀花、野菊花等植物中提取出來的一種天然的黃酮類化合物,它具有多種藥理活性,比如抗炎,抗過敏,抗菌,抗病毒等。木犀草素在自然界中多以糖苷的形式存在,具有C6-C3-C6 碳骨架的苯并-γ-吡喃酮結(jié)構(gòu)。化學(xué)式為C15H10O6,分子量是286.24,微溶于水,具弱酸性,可溶于堿性溶液中。木犀草素能夠與鐵、鎂、鈣、銅、鋁、鋯等金屬離子生成帶色的絡(luò)合物。主要存在于金銀花、菊花、荊芥、白毛夏枯草、洋薊、紫蘇屬、黃芩屬、裸花紫珠等天然藥材中。
藥用植物中木犀草素含量的測定方法,一般采用高效液相色譜(HPLC)或液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)。
1.樣品提取
將樣品進(jìn)行粉碎,過二號(hào)篩,精確稱量2g,放置于錐形瓶中,加入85%的甲醇溶液25ml。加熱回流1.5h放冷稱量,用85%甲醇補(bǔ)充減少的重量,搖勻過濾待測。
2.色譜條件
使用C18色譜柱,250mmx4.6mm,5um;柱溫:室溫。流動(dòng)相為甲醇-0.5%冰醋酸溶液(50:50),或甲醇為流動(dòng)相A,0.05%磷酸溶液為流動(dòng)相B,梯度洗脫,流速1.0ml/min;紫外檢測器,波長350nm,進(jìn)樣量5-10uL;理論塔板數(shù)不低于5000。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
稱取木犀草素的標(biāo)準(zhǔn)品若干克,加入甲醇制成70ug/ml的溶液。然后,進(jìn)行成倍的梯度稀釋5-7個(gè)點(diǎn),一般是用6個(gè)。稀釋的最低濃度點(diǎn)要在檢測限的范圍內(nèi),確保線性的準(zhǔn)確性。將標(biāo)準(zhǔn)溶液依次進(jìn)樣到HPLC中,測出對應(yīng)的色譜峰。由于這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液是相對純凈的,可以獲得有效的色譜峰保留時(shí)間。通過這個(gè)保留時(shí)間的位置,就可以去尋找樣品的目標(biāo)色譜峰。對色譜峰面積進(jìn)行積分,并結(jié)合對應(yīng)的溶液濃度,繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程,相關(guān)系數(shù)r2>0.999。
4.樣品測定和計(jì)算
根據(jù)測出來樣品的色譜峰,對它進(jìn)行手動(dòng)或自動(dòng)積分,代入到回歸方程,是可以計(jì)算出樣品的木犀草素含量。