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根皮苷來源于蘋果的樹皮,根皮,莖,葉子等部位,屬于黃酮類化合物中的二氫查耳酮物質(zhì)。化學(xué)式為C21H24O10,分子量為436.41,含量低時水溶性好,含量高時難溶于水,易溶解于乙醇等。從藥理學(xué)角度來看,具有降低血糖,改善記憶力,抗氧化,抗菌等作用,一般用在制藥或食品領(lǐng)域,
實驗室檢測方法,包括高效液相色譜(HPLC)法,液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)法
1.樣品處理
通常采用乙醇等溶劑,超聲波浸提進(jìn)行處理。比如蘋果樣品,先將蘋果切碎,混合均勻,稱取20g加入90%的乙醇100mL,6000r/min,勻漿3min。再加300ml的90%乙醇溶液轉(zhuǎn)移到1L的圓底燒瓶中,攪拌均勻,80℃加熱回流1h,冷卻過濾。45℃旋蒸至60ml,轉(zhuǎn)移到分液漏斗中,加入80ml乙酸乙酯萃取2次,合并到250ml的圓底燒瓶中,繼續(xù)旋蒸到干。用1ml的甲醇清洗圓底燒瓶3次,轉(zhuǎn)移到5ml的容量瓶中,用甲醇定容,0.45um膜過濾,待測。
2.色譜條件
C18的色譜柱,250mm長,4.6um內(nèi)徑,5um粒徑,柱溫30℃;乙腈和0.01%三氟乙酸水溶液(25:75)為流動相,流速1ml/min,進(jìn)樣量10ul。紫外檢測器,波長254nm。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
先配制6個標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,是用根皮苷作為標(biāo)準(zhǔn)品,先用乙腈或甲醇溶解定容,配制成1mg/mL溶液。然后梯度稀釋10ug/mL,25ug/mL,50ug/mL,100ug/mL,250ug/mL,500ug/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別注入HPLC中,測出色譜峰,記錄保留時間和峰面積,并對峰面積進(jìn)行積分處理。以對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度和色譜峰面積,繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。
4.樣品測定和計算
同樣的方法,將制備好的樣品,注入到HPLC中,根據(jù)保留時間識別出目標(biāo)的色譜峰。對色譜峰面積進(jìn)行積分,代入到回歸方程,可以計算出樣品中的根皮苷的含量。